黑锹小角（小林昭二 饰）率领的忍者军团行动失败，柳生鞘香（松尾嘉代 饰）带领其麾下的女子刺客军团继续追踪拜一刀父子的踪迹。阿波藩的蓝玉制造密法被幕府盗走，拜一刀（若山富三郎 饰）受聘刺杀盗走密法之人。 尾张藩别式女（护卫殿下安全的随身侍女）小雪（东三千 饰）被藩士孤冢元记（岸田森 饰）用妖刀打败，愤而脱藩。尾张藩派出多名刺客追杀，皆死于小雪手下。其中一名被杀刺客的妻子为报夫仇，雇用拜一刀（若山富三郎 柳生烈堂（大木实 饰）的三个儿子在追杀拜一刀父子的过程中接连战死，于是派出手里最后的王牌——善于使用手里剑的女儿香织（瞳顺子 饰）。最终仍难逃落败的命运。 愤怒的柳生烈堂找到自己庶出的儿子——土 史上最另类超级英雄、语不惊人死不休的死侍（瑞安·雷诺兹 Ryan Reynolds 饰）睽违六年终于万众瞩目重返大银幕，更首度加入漫威电影宇宙！除了与老搭档钢力士、负音波少年弹头和雪绪再度聚首，更将与 同为职业“清理工”的两人意外撞单，接到了同一个任务——掩盖一起犯罪现场。迫于局势，互相看不顺眼的两位“孤狼”被迫联手，摆脱一连串的致命麻烦。然而，他们发现整件事正逐渐失控…… 
